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單個(gè)分子光學(xué)檢測儀器的搭建和應(yīng)用

時(shí)間:2007-12-27 15:42:00來源:caojing

導(dǎo)語:?單個(gè)分子光學(xué)檢測技術(shù)是近20年來迅速發(fā)展起來,并在生命科學(xué)領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)新興技術(shù)。
單個(gè)分子光學(xué)檢測技術(shù)是近20年來迅速發(fā)展起來,并在生命科學(xué)領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)新興技術(shù)。 以單個(gè)分子為研究對(duì)象可以得到基于單個(gè)分子的統(tǒng)計(jì)行為,這同傳統(tǒng)的大量分子體系實(shí)驗(yàn)所得的平均值相比包含更多更深層次的信息。同時(shí),在單個(gè)分子水平上可以直接觀察單個(gè)事件的發(fā)生與發(fā)展,這在傳統(tǒng)的大量分子體系中是做不到的。這一技術(shù)為生命過程在分子水平上的可視化開辟了道路。 在Nikon TE30倒置顯微鏡的基礎(chǔ)上,我們搭建了遠(yuǎn)場寬場照明單個(gè)分子檢測系統(tǒng)。寬場照明的基本原理如圖1。人射的平行光經(jīng)過物鏡匯聚后在激發(fā)焦平面內(nèi)形成尺寸可控的光區(qū),從而激發(fā)一定范圍的樣品。經(jīng)估算本套裝置的光檢測效率約為3%。
圖 1寬場照明激發(fā)示意圖
圖2單個(gè)24聚體蛋白分子的擴(kuò)散均方根位移隨時(shí)間的變化
在單個(gè)分子的水平上觀察到小熱休克蛋白16.5二十四聚體的布朗運(yùn)動(dòng)和其它動(dòng)力學(xué)過程。圖2是擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)的例子。利用Einstein關(guān)系式(=4Dt),通過擬合圖中數(shù)據(jù)得到擴(kuò)散系數(shù)(1.0x101em=/s)與理論值(1.56x 10“cmz/s)相符。

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